阿米舒必利-過氧化物酶標(biāo)記物的免疫活性檢測方法的原理是什么?
阿米舒 必 利-過氧化物酶標(biāo)記物|Amisulpride-Peroxidase Conjugate(Amisulpride-HRP)
阿米舒必利 - 過氧化物酶標(biāo)記物的免疫活性檢測方法主要有酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)等,其原理如下:
一、基本原理
抗原抗體特異性結(jié)合
阿米舒必利 - 過氧化物酶標(biāo)記物作為一種抗原,能夠與樣本中特異性的抗體發(fā)生結(jié)合。這種結(jié)合是高度特異性的,即只有針對阿米舒必利的抗體才能與之結(jié)合。
例如,在檢測血清樣本中是否存在阿米舒必利抗體時(shí),若樣本中含有該抗體,就會與標(biāo)記物上的阿米舒必利發(fā)生特異性結(jié)合。
酶促反應(yīng)產(chǎn)生可檢測信號
過氧化物酶能夠催化特定的底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生可檢測的信號。常見的底物如四甲基聯(lián)苯胺(TMB),在過氧化物酶的作用下會發(fā)生顏色變化。
當(dāng)阿米舒必利 - 過氧化物酶標(biāo)記物與抗體結(jié)合后,通過加入底物,過氧化物酶催化底物發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生顏色變化、發(fā)光等信號。
二、ELISA 具體原理
包被
將阿米舒必利 - 過氧化物酶標(biāo)記物或未標(biāo)記的阿米舒必利(作為捕獲抗原)包被在固相載體(如酶標(biāo)板)表面。這個(gè)過程通常是通過物理吸附或化學(xué)結(jié)合的方式,使抗原牢固地固定在載體上。
封閉
加入封閉液,封閉載體表面未結(jié)合抗原的位點(diǎn),以減少非特異性結(jié)合。通常使用牛血清白蛋白、脫脂奶粉等蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行封閉。
加樣
加入待檢測的樣本(如血清、血漿等),如果樣本中含有針對阿米舒必利的抗體,這些抗體就會與包被在載體上的抗原結(jié)合。
洗滌
用洗滌液洗去未結(jié)合的物質(zhì),包括未結(jié)合的抗體和其他雜質(zhì),以降低背景信號,提高檢測的特異性。
加酶標(biāo)二抗
加入與一抗(樣本中的抗體)特異性結(jié)合的酶標(biāo)二抗。二抗通常是用酶(如過氧化物酶)標(biāo)記的,能夠與一抗結(jié)合,并且攜帶酶分子。
洗滌
再次洗滌,去除未結(jié)合的酶標(biāo)二抗。
加底物
加入過氧化物酶的底物,如 TMB。在過氧化物酶的催化下,底物發(fā)生顏色變化或產(chǎn)生發(fā)光等信號。
檢測信號
使用酶標(biāo)儀等設(shè)備檢測反應(yīng)產(chǎn)生的信號強(qiáng)度。信號強(qiáng)度與樣本中阿米舒必利抗體的含量成正比,通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較,可以確定樣本中抗體的濃度。
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