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綠原酸-雞卵清白蛋白偶聯(lián)物的偶聯(lián)反應(yīng)有哪些?

2024-10-18 [26]

綠原酸-雞卵清白蛋白偶聯(lián)物|Chlorogenic Acid-Ovalbumin Conjugate(CA-OVA Conjugate)

綠原酸 - 雞卵清白蛋白偶聯(lián)物的偶聯(lián)反應(yīng)主要有以下幾種方式:

 

1.碳二亞胺法:

原理:碳二亞胺可以激活綠原酸分子中的羧基,使其與雞卵清白蛋白上的氨基發(fā)生縮合反應(yīng),形成酰胺鍵,從而將綠原酸與雞卵清白蛋白偶聯(lián)起來。例如,常用的碳二亞胺試劑有 1 - 乙基 - 3-(3 - 二甲基氨基丙基) 碳二亞胺(EDC)等。

步驟:首先將綠原酸、雞卵清白蛋白和 EDC 溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中,然后在一定的溫度和 pH 條件下反應(yīng)一段時間。反應(yīng)結(jié)束后,通過透析或凝膠過濾等方法去除未反應(yīng)的試劑和雜質(zhì),得到綠原酸 - 雞卵清白蛋白偶聯(lián)物。

2.戊二醛法:

原理:戊二醛是一種雙功能交聯(lián)劑,能夠與綠原酸和雞卵清白蛋白上的氨基發(fā)生反應(yīng),形成席夫堿結(jié)構(gòu),從而實現(xiàn)兩者的偶聯(lián)。

步驟:將雞卵清白蛋白溶解在緩沖液中,加入適量的戊二醛,攪拌反應(yīng)一段時間,使戊二醛與雞卵清白蛋白上的氨基充分反應(yīng)。然后加入綠原酸,繼續(xù)在適當(dāng)?shù)臈l件下反應(yīng)。反應(yīng)完成后,進行純化處理以獲得偶聯(lián)物。

3.馬來酰亞胺法:

原理:如果對綠原酸或雞卵清白蛋白進行適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)修飾,引入巰基,然后利用馬來酰亞胺與巰基的特異性反應(yīng),可以實現(xiàn)兩者的偶聯(lián)。這種方法具有較高的特異性和選擇性。

步驟:例如,先將綠原酸進行修飾使其帶有巰基,或者對雞卵清白蛋白進行改造引入馬來酰亞胺基團。然后將兩者在合適的條件下混合反應(yīng),通過馬來酰亞胺與巰基的反應(yīng)形成共價鍵,從而得到偶聯(lián)物。

4.活性酯法:

原理:將綠原酸轉(zhuǎn)化為活性酯形式,如 N - 羥基琥珀酰亞胺酯(NHS 酯),活性酯可以與雞卵清白蛋白上的氨基快速反應(yīng),形成穩(wěn)定的酰胺鍵,完成偶聯(lián)。

步驟:制備綠原酸的 NHS 酯,將其與雞卵清白蛋白在緩沖液中混合,在一定的溫度和 pH 條件下反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后,通過純化步驟去除未反應(yīng)的物質(zhì),得到純凈的綠原酸 - 雞卵清白蛋白偶聯(lián)物。

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